实验原理

实时荧光定量PCR技术于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR(real-timequantitativePCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。

Real-TimePCR常用的两种方法为：SYBRGREEN（荧光染料掺入法）和Taqmanprobe（探针法）。

SYBRgreen法：

在PCR反应体系中，加入SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步、

TaqmanProbe法：

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一段寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

服务内容：

根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针；

提取样品的 RNA/DNA，并反转录成 cDNA

Real-Time PCR，进行实验结果分析；

提供完整的实验报告。

您需要提供的信息：

新鲜且足量的样本材料，或直接提供纯化好的总 RNA 或 DNA（大于 5ug/样品）。

提供已知的全长基因序列，Gene ID，详细背景资料，DNA/RNA 来源、丰度等。

服务周期：

小于 15 个样本（包括 RNA 提取，反转录，引物验证，检测完成），15 个工作日。大于 15 个样本，根据具体情况而定。

客户须知：

请保证提供信息的准确性，如因信息问题实验失败，后果由客户承担。

如提供提取完成的 RNA/DNA 要保证符合我们实验的标准。

服务承诺：

本公司会在最短的时间内快速将实验完成。

本公司会为您提供详细的报告，报告提供的内容完全可以满足你论文或是写文章的需要。

本公司保证检测结果准确、客观、可信，但不能确保一定要得到某特定结果。